檢測認證人脈交流通訊錄
- 無菌脫纖維馬血
標本的采集及保存
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細的記錄。最后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
無菌脫纖維馬血
血清說明:
1、不含防腐劑;艾滋病HIV,梅毒TP、乙肝HBV、丙肝HCV,四個標本檢測均為陰性。未滅活,未除菌,不能用于臨床
2、為實驗材料,以及作為動物免疫、病理組化封閉、血清IGG制備、細胞培養(yǎng)、ELisa等免疫實驗中的封閉及保護劑的使用。
3、血清解凍后有濁度或少量懸浮物,為蛋白聚合體,不會影響血清的質(zhì)量,如有必要用0.45um濾膜過濾。
無菌脫纖維馬血
操作步驟
試管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊紅細胞: 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清:待測血清 0.2ml,加應(yīng)用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標準管:全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對照:補體 CH50 測定試管法
5、結(jié)果測定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
確定與標準管最接近者為終點管,然后按下公式計算 CH50 值:
血清補體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。
如第 5 管為終點管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。