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上海篤瑪生物科技有限公司

檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄

篤瑪 石榴皮鞣素 說(shuō)明書(shū)

  • 這真不是您需要的產(chǎn)品？
  • 品　　牌：
  • DM
  • 主要規(guī)格：
  • 10mg
  • 用　　途：
  • 科研
    • 石榴皮鞣素 操作步驟 試管法（改良 Mayer 法） 1、致敏羊紅細(xì)胞： 2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（ 1:2000），混勻，置 37℃水浴 30min。 2、稀釋血清：待測(cè)血清 0.2ml，加應(yīng)用液 3.8ml，稀釋度為 1:20。 3、配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：全溶血管:2%綿羊紅細(xì)胞 2ml 加 8ml 蒸餾水，混勻。 50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。 4、按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置 37℃水浴 30min， 第 10 管為非溶血對(duì)照：補(bǔ)體 CH50 測(cè)定試管法 5、結(jié)果測(cè)定：取出試管， 2000r/min 離心 10min，對(duì)照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與 50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計(jì)測(cè)（波長(zhǎng) 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值， 確定與標(biāo)準(zhǔn)管最接近者為終點(diǎn)管，然后按下公式計(jì)算 CH50 值： 血清補(bǔ)體 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀釋度。 如第 5 管為終點(diǎn)管，測(cè)待測(cè)血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。 石榴皮鞣素 標(biāo)本要求 1. 血清： 室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保 存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 2. 血漿： 應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。 3.尿液： 用無(wú)菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀 形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。 4.細(xì)胞培養(yǎng)上清： 檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。 5.培養(yǎng)細(xì)胞: 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100 萬(wàn)/ml 左右。 通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左 右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 6.組織標(biāo)本: 切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化 后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻 漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢 測(cè)，其余冷凍備用。 7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn) 行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 8.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 石榴皮鞣素 試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及其相應(yīng)的解決辦法 1 選擇試劑 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。 2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 3 孵育 可能原因： 1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 6 終止 可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 7 讀板 如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。 在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。 溫馨提示：不可用于臨床治療。

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