檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄
- 驢血清
操作步驟
試管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊紅細(xì)胞: 2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清:待測(cè)血清 0.2ml,加應(yīng)用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管:全溶血管:2%綿羊紅細(xì)胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對(duì)照:補(bǔ)體 CH50 測(cè)定試管法
5、結(jié)果測(cè)定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對(duì)照管應(yīng)不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管,再用分光光度計(jì)測(cè)(波長(zhǎng) 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
確定與標(biāo)準(zhǔn)管最接近者為終點(diǎn)管,然后按下公式計(jì)算 CH50 值:
血清補(bǔ)體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。
如第 5 管為終點(diǎn)管,測(cè)待測(cè)血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。
驢血清
常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門(mén)設(shè)計(jì)用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用最廣泛的一種。
GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高,表達(dá)產(chǎn)物純化方便,利于GST抗體制備的特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細(xì)菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè),以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測(cè)GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w,也可以檢測(cè)和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測(cè)GFP融合表達(dá)蛋白等。
Myc標(biāo)簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過(guò)偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力,因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)但很少用于純化。
HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型,相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運(yùn)用。
MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá),MBP可以融合在蛋白的N端或C端??捎肕BP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。
其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但應(yīng)用相對(duì)較少。
驢血清
性能:
1.準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2.靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
上海篤瑪生物科技有限公司包被抗體均使用進(jìn)口抗體,質(zhì)量穩(wěn)定,性價(jià)比高
優(yōu)勢(shì):
1.高效,靈敏,特異的抗體
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性
3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高和固相載體
4.適用血清,血漿,組織勻漿液,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液等多種標(biāo)本類型
上海篤瑪生物科技有限公司供應(yīng)的經(jīng)國(guó)家認(rèn)證,以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,并得到權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。公司專業(yè)提供各種種屬,供應(yīng)的ELISA試劑盒統(tǒng)一價(jià)銷(xiāo)售。
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楊燕燕
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