檢測認(rèn)證人脈交流通訊錄
- 1.名稱:TMB底物液,單組份底物液,ELISA 底物顯色液。
2. 產(chǎn)品描述:
用于HRP標(biāo)記的ELISA;單一組分,穩(wěn)定,使用方便,靈敏度高。主要成分是3,3’,5,5’–四甲基聯(lián)苯胺[3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine(TMB)],是辣根過氧化物酶(HRP)的底物,在辣根過氧化物酶的作用下,發(fā)生氧化劑反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物。顏色的強(qiáng)弱與HRP的活性呈正比,從而可以用于基于HRP標(biāo)記物的檢測。
規(guī)格: 10mL, 1000mL, 5000mL
3.保存及運(yùn)輸:
常溫運(yùn)輸(勿超過30℃),2-8℃儲存12個月。
4.使用方法:
根據(jù)計劃使用的數(shù)量,將該次需要的TMB顯色液從大瓶轉(zhuǎn)移的干凈的避光小瓶中。后續(xù)從小瓶中取用
1)加液:加完HRP結(jié)合物并溫育一定時間后,洗板3-5次,每孔加TMB顯色液100μL - 200μL。
2)根據(jù)個人實(shí)驗(yàn)需要,在室溫(15-25℃)或37°C下溫育10-30分鐘。
3)終止:加50微升的2M鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng),孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
4)讀數(shù):終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)在450nm處讀數(shù)。
如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數(shù);或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物
5.注意事項(xiàng):
1)適用于HRP標(biāo)記的ELISA實(shí)驗(yàn),該底物中含TMB和過氧化氫,在HRP的作用下,被氧化形成水溶性藍(lán)色產(chǎn)物,在370nm和650nm有吸收峰。進(jìn)行動力學(xué)實(shí)驗(yàn)時,可直接檢測650 nm的吸光度。由于藍(lán)色會不斷加深,推薦及時加入終止液,加入酸性終止液后溶液變成穩(wěn)定的黃色,檢測波長為450 nm,吸光度值可較不終止增加數(shù)倍且保持穩(wěn)定。
2)該底物對微量的HRP酶敏感,在使用過程中應(yīng)避免污染,切忌將槍頭直接插入大瓶中取液。一旦未使用的顯色液變藍(lán)了,說明試劑遭到污染,需停止使用。
3)操作過程中避免陽光的直射,分裝的容器建議用塑料容器,避免使用金屬容器以及細(xì)菌和氧化還原劑污染的容器。
4)大量分裝時最好使用稱重的方法或蠕動泵。
5)過高濃度的HRP會導(dǎo)致TMB呈現(xiàn)綠色或紅色,或終止后出現(xiàn)沉淀,應(yīng)該減少抗體和標(biāo)記物的用量或縮短孵育時間。
6)本品的靈敏度和信號水平可能優(yōu)于客戶目前正在使用的顯色液,為了減少陰陽性的誤判,需調(diào)整陰陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)以避免錯判。
武漢英科生物技術(shù)有限公司
于小姐
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