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流式細胞凋亡檢測服務(wù)

  • 這真不是您需要的產(chǎn)品?
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    •   流式細胞凋亡檢測服務(wù)通常稱為細胞程序性死亡,是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細胞凋亡與多種疾病密切相關(guān),如癌細胞具有連續(xù)增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷,療效評價和預(yù)后預(yù)測提供了重要的參考指標。   流式細胞凋亡檢測服務(wù)(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織,只要經(jīng)過一步染色反應(yīng),洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細胞凋亡檢測服務(wù)檢測到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細胞。   細胞凋亡(apoptosis)是一件主動性細胞死亡事件,它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控,是細胞為更好地適應(yīng)環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。具體表現(xiàn)為:出芽形成凋亡小體、核小體間DNA的切割,凋亡小體被吞噬和消化等幾個連續(xù)過程等.   細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時   抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時,的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標記的dUTP(fluorescein-dUTP),從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞凋亡檢測服務(wù)進行檢測,這就是TUNEL法檢測細胞凋亡的原理。注:FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫,實際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。   有如下優(yōu)點:   (1)高靈敏度:背景染色極低,陽性染色明亮,可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。   (2)特異性:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。   (3)快速:僅需約1-2個小時即可完成。   (4)方便:只需一步染色反應(yīng),洗滌后即可觀察,不必使用二抗等進行多步操作。   (5)應(yīng)用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。   TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,另一方面也不會把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。   極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,同時檢測多個凋亡指標。   細胞凋亡或稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是細胞的生命現(xiàn)象之一,它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)及自身反應(yīng)性T淋巴細胞的清除等方面起著十分重要的作用。細胞凋亡調(diào)節(jié)的失控可導(dǎo)致臨床各種疾病的發(fā)生。如老年性癡呆與神經(jīng)細胞凋亡過度有關(guān),自身免疫性疾病和腫瘤與細胞凋亡的抑制有關(guān)。細胞凋亡有別于細胞壞死,它有一系列的細胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變,包括出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細胞,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine, PS)位于細胞膜的內(nèi)側(cè),但在凋亡的細胞,PS 從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,在細胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合。因此將Annexin-Ⅴ進行熒光素(如FITC、PE)或生物素(Biotin)標記,以標記了的Annexin-Ⅴ作為探針,利用流式細胞凋亡檢測服務(wù)或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。   流式細胞凋亡檢測服務(wù)與流式細胞凋亡檢測服務(wù)實驗步驟相近:   1. 凋亡細胞的制備   小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重,10 h后解剖取胸腺,分離胸腺細胞。用PBS洗兩遍,調(diào)整待測細胞的濃度為2×106 /ml,備用。   2. 200 μl細胞懸液加入1 ml冷PBS,輕輕震蕩使細胞懸浮,1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘,棄上清。   3. 重復(fù)步驟2兩次。   4. 將細胞重懸于200 μl 標記緩沖液。   流式細胞凋亡檢測服務(wù)和流式細胞凋亡檢測服務(wù)注意事項:   1. 整個操作過程動作要盡量輕柔,切勿用力吹打細胞,盡量在4 ℃下操作。   2. 反應(yīng)完畢后要盡快檢測,因為細胞凋亡是一個動態(tài)的過程,反應(yīng)一小時后熒光強度就開始衰變。   3. Annexin V-FITC是光敏物質(zhì),在操作時要注意避光。   流式細胞凋亡檢測服務(wù)如何避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果?細胞接種不易過密:接種對數(shù)生長期的細胞時密度不要>1*106,以免細胞培養(yǎng)過程中自身引起凋亡,而非外界處理因素;   避免消化過度:因消化過度可能會造成PS外翻,得到假陽性的結(jié)果。因此消化時最好用低濃度胰酶消化,輕柔吹打貼壁細胞2-3次,盡量把胰酶造成損傷可以控制在5%以內(nèi),加上對照組的情況下對實驗結(jié)果不會造成明顯影響;   操作盡量輕柔:收集細胞時力度過大很可能造成細胞膜損傷,導(dǎo)致細胞膜的磷脂層,從而結(jié)合Annexin V,導(dǎo)致假陽性,因此處理貼壁細胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷。   毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實驗室,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團隊曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作,秉承“為客戶創(chuàng)造價值,為員工實現(xiàn)夢想,為社會創(chuàng)造財富"的經(jīng)營理念,堅持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。 流式細胞凋亡檢測服務(wù)http://www.yuxiubio.com/Products-33749171.html http://www.yuxiubio.com/
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