整套系統(tǒng)包含了配有數(shù)碼相機(jī)的倒置顯微鏡，二維顯微鏡機(jī)動(dòng)載物臺(tái)，一維機(jī)動(dòng)顯微操縱器，CellSorter 控制單元，和注射泵。我們采用液體靜壓力方式進(jìn)行細(xì)胞沉積，微量吸液管連接到一個(gè)可旋轉(zhuǎn)的顯微鏡操作臂，可從35mm 的培養(yǎng)皿中提取細(xì)胞，并且沉積到玻璃載片或者80PCR管中。

        全自動(dòng)細(xì)胞分選儀配備高精度微移液管支架，控制臺(tái)始終保證微量吸液管位于視場(chǎng)的正中心， 并且微移液管控制臺(tái)可非常容易地安裝在物鏡上，同時(shí)軟件可對(duì)移液管的位置進(jìn)行偏差校準(zhǔn)。

        微移液管的尖端可通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)控制臺(tái)的旋鈕進(jìn)行手動(dòng)聚焦，且微移液管的尖端科在顯微鏡中非常容易的被觀察到，同時(shí)顯微鏡的圖像可跟進(jìn)調(diào)整； 玻璃微移液管更換非常便捷，當(dāng)更換培養(yǎng)皿時(shí)簡(jiǎn)單地取下來(lái)分選針頭即可。

 

設(shè)備特點(diǎn)

  Ø  兼容所有的倒置顯微鏡

  Ø  快速手動(dòng)調(diào)節(jié)通過(guò)LED照明光源

  Ø  分選針頭更換快速、便捷

  Ø 可通過(guò)連接環(huán)完美的安裝到顯微鏡的物鏡上

 

自動(dòng)單細(xì)胞沉積功能：

  *  單細(xì)胞輸送到達(dá)每一個(gè)PCR管                

  * 滴液體積小于1ul

  *  一個(gè)循環(huán)可裝滿80個(gè)PCR管                   

  * 每個(gè)Cell沉積時(shí)間15~20秒

  *  可在一個(gè)玻璃蓋玻片上原位測(cè)試單個(gè)細(xì)胞沉積

 

CellSorter微量吸液管非自動(dòng)化的細(xì)胞沉積平臺(tái)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

a． 微量吸液管的路徑。

       在一個(gè)典型的分類過(guò)程中，可根據(jù)路徑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行逐個(gè)提取，有200個(gè)細(xì)胞從培養(yǎng)皿中被提取。比例尺：100μm。

b． 硬件仿真模擬的控制軟件。

       在虛擬的培養(yǎng)皿中，熒光細(xì)胞被標(biāo)記為綠色小球，通過(guò)微量吸液管對(duì)細(xì)胞進(jìn)行提取。

c． 微量吸液管定位裝置微量吸液管布局圖。

       控制臺(tái)通過(guò)物鏡環(huán)固定在物鏡上方，玻璃微量吸液管被固定在控制臺(tái)中心光軸位置。微量吸液管頂端通過(guò)LED燈照射，照射光通過(guò)微量吸液管直接被引入到物鏡。微量吸液管尖端可通過(guò)手動(dòng)調(diào)節(jié)彈簧旋鈕上下移動(dòng)到物鏡焦點(diǎn)位置。培養(yǎng)皿可以進(jìn)行水平移動(dòng)，微量吸     液管上端通過(guò)撓性導(dǎo)管連接到注射泵上。

              

 

計(jì)算機(jī)控制單元

       全自動(dòng)細(xì)胞分選儀控制臺(tái)可通過(guò)計(jì)算機(jī)USB接口控制流體閥和顯微LED照明光源，同時(shí)也可以自由地控制顯微鏡熒光快門，并且整合了高速控制閥實(shí)現(xiàn)流體快速、精密控制。

注射泵

全自動(dòng)細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)配置注射泵型號(hào)為NE-1000

Ø簡(jiǎn)易鍵盤操作界面

Ø最大可裝配一個(gè)60cc的注射器

Ø輸液率：0.73μL/小時(shí)（1cc注射器）到2100ml/小時(shí)（60cc注射器）

          * 其他規(guī)格的泵也可以整合在該設(shè)備中使用。

 

玻璃微移液管

       全自動(dòng)細(xì)胞分析儀使用微量吸液管對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分選，微量吸液管內(nèi)孔徑范圍為50~80um；

可根據(jù)客戶的應(yīng)用提供最優(yōu)的內(nèi)孔徑方案；更小的微移液管可達(dá)亞微米級(jí)，用于大分子的操縱。

 

 

自動(dòng)單細(xì)胞沉積到PCR管

Ø  可將單細(xì)胞移動(dòng)到每一個(gè)PCR管中

Ø  一個(gè)循環(huán)可填滿10PCR條，容納80個(gè)管

Ø  蓋玻片單細(xì)胞原位沉積試驗(yàn)

Ø  最小滴定體積優(yōu)于1ul

Ø  15~20秒每個(gè)細(xì)胞

 

 

單細(xì)胞提取

    

圖a為蓋玻片上15個(gè)NE-4C單細(xì)胞培養(yǎng)基滴液，通過(guò)顯微鏡觀測(cè)，滴液間距為5mm。滴液體積大約為0.74 ±0.03 μl。

相位對(duì)比圖b和熒光圖c是滴液中一個(gè)完整的細(xì)胞。通過(guò)排序篩選后出現(xiàn)在小滴液中顯示為相位對(duì)比和熒光兩種模式，箭頭位置為滴液中的細(xì)胞。

相差(b)和(c)的熒光圖像單個(gè)細(xì)胞完整無(wú)損。在下降。在排序過(guò)程中細(xì)胞檢測(cè)的小滴在兩相襯和熒光模式。箭頭指向細(xì)胞在一個(gè)下降。

 

細(xì)胞損傷

       3T3細(xì)胞培養(yǎng)圖a和提取后圖b。圖a中4個(gè)細(xì)胞用白框進(jìn)行標(biāo)注；圖b中注意箭頭所指位置為細(xì)胞突殘留在表面。在這個(gè)排序中只有這4個(gè)以外的一個(gè)細(xì)胞存活了。

微量吸液管的孔徑截面圖列在圖a左下角。比例尺：100mm

 

細(xì)胞存活

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

        NE-4C（圖a）和3T3（圖c）細(xì)胞培養(yǎng)前，細(xì)胞排序后圖b、d。頂面板顯示培養(yǎng)出的細(xì)胞和分選后底部面板，分選的細(xì)胞用白框標(biāo)注。圖e顯示細(xì)胞分選2小時(shí)后的存活狀況：NE-4C細(xì)胞左列為4個(gè)NE-4C以外的3個(gè)幸存細(xì)胞的相襯顯微鏡圖；右列為同樣的細(xì)胞通過(guò)亞甲藍(lán)染色后通過(guò)203物鏡捕捉到的圖像。3T3細(xì)胞左列為3個(gè)幸存細(xì)胞圖像，培養(yǎng)細(xì)胞在分選前用胰島素—EDTA預(yù)處理過(guò)。微量吸液管的孔徑截面圖列在圖a右上角。所有圖像比例尺：100mm，明視場(chǎng)e圖像比例尺為：25mm